Fusión de proteína codificada por el gen CEL7A de Trichoderma reesei expresado en Pichia pastoris para incrementar actividad celulasa en la producción de biocombustibles
Resumen
La preocupación mundial por cambiar los combustibles fósiles a alternos, para poder suplir la demanda de la energía requerida es creciente. Se ha sabido del bioetanol desde años atrás, y la necesidad de la enzima celulasa presenta costos altos; por tanto, se buscan maneras de reducir y hacer más eficiente y viable un proceso de este tipo. La celulasa es una enzima que se encarga de la hidrólisis de la celulosa, rompiendo los enlaces glicosídicos β-1,4 de la celulosa transformándola en glucosa. El gen cel7a codifica para la proteína de interés, conocida como celulosa 1,4-beta-celobiosidasa (EC 3.2.1.91). Se propone la unión in silico de dos secuencias iguales del gen codificante de la celulasa de interés, a partir de Trichoderma reesei, creando una proteína de fusión unida por un linker, mismo que será tomado de una proteína quimérica patentada. Posteriormente se inserta en un vector que será expresado en una levadura, Pichia pastoris, con el fin de incrementar la actividad catalítica que será útil en la producción de biocombustible. Dicho proceso se basa en el diseño de primers, ciclos de Polymerase Chain Reaction estándar y overlap, así como transformación y transfección mediante electroporación y posterior análisis estructural utilizando herramientas bioinformáticas.